تعیین نیمه کمی میزان بیان mrna اینترفرون گاما با استفاده از روش rt-pcr

Authors

جلیل توکل افشاری

jalil tavakol afshari علیرضا زمانی

alireza zamani جواد بهروان

javad behravan بهروز شیشه ئیان

behrouz shisheeyan بیتا سیفی

abstract

سایتوکاینها واسطه های شیمیائی هستند که از سلولهای سیستم ایمنی ترشح شده، و بر سلولهای دیگر یا خود سلول ترشح کننده اثر می کنند. بیان متفاوت ژن سایتوکاینها در بدن مشخص کننده نوع پاسخ ایمنی (از نوع th1 یا th2) است که خود این پاسخ متفاوت می تواند نقش مهمی در پاتوژنز بیماریها داشته باشد. از عمده ترین سایتوکاینهای سلولهای th1 می توان به ifn-γ و il-2 اشاره کرد. که در پاسخهای ایمنی علیه پاتوژنهای داخل سلولی شرکت می کنند. با توجه به اینکه بیان ژن سایتوکاینها منجمله اینترفرون موقتی بوده و در یک مدت زمان محدود می باشد ، به این علت لازم است بیان ژن آنها (مقدار mrna) توسط روشهای حساس و دقیقتری همانند rt-pcrاندازه گیری شود .بعلاوه تعیین زمان مورد نیاز جهت ماگزیمم بیان ژن می تواند در مطالعات کلونینگ و استعداد ابتلا به بیماریها در بعضی ازافراد کاربرد داشته باشد.           بعد از کشت لنفوسیتها در حضور pha (phytohaemagglutinin) ( با غلظت 1μg/106cell ) در زمانهای متفاوت (72،0،4،8،12،24،48 ساعت) و استخراج rna توتال از آنها و سنتز cdna تک رشته ای اقدام به انجام rt-pcr شد. چون در تمام ساعات انکوبه جواب مثبت بود لذا در مرحله بعدی اقدام به تیتراسیون cdnaحاصل با ضریب رقت 1.2 (رقتهای متوالی 1.2، 1.4، 1.8،و….) شد. بر روی ژل الکترفورز (2%) قطعه مورد نظر (273bp ) مشاهده شد.           نتایج بدست آمده از rt-pcr و semi-quantitative-rt-pcr نشان می دهد بعد از چهار ساعت انکوباسیون لنفوسیتها با pha ، بیشترین بیان ژن را دارند (تیتر cdna=512) و معمولاً بعد از گذشت 24 ساعت مقدار آن به سطح اولیه (قبل از تحریک) بر می گردد.           با توجه به نتایج فوق و مقایسه آن با نتایج محققین دیگر می توان گفت روش rt-pcr  حساسترین روش سنجش بیان ژن جهت سایتوکاینهاست و بیان ژن اینترفرون بعد از گذشت چهار ساعت انکوبه به ماکزیمم می رسد. بنابر این مدت زمان انکوباسیون با pha جهت بررسی اثر عوامل مختلف بر تولید و بیان ژن اینتر فرون گاما زمان ایده آلی است.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

تعیین نیمه کمی میزان بیان mRNA اینترفرون گاما با استفاده از روش RT-PCR

Cells communicate with one another not only by cell-cell contact, but also via the elaboration of soluble mediators or cytokines. The functionally distinct repertoire of secreted cytokines of Th1/Th2 cells has been shown to play an important role in the pathogenesis of inflammatory diseases. Effector Th1 cells secretes predominantly IFN- γ and IL-2 and regulates cell-m...

full text

Improved mRNA quantitation in LightCycler RT-PCR.

BACKGROUND Real-time polymerase chain reaction (PCR) utilizing the LightCycler and similar systems is an increasingly used technique for quantitative reverse transcription (RT)-PCR of mRNA levels from genes of immunologic interest. A commonly encountered limitation with these systems is that the fluorescence induced by SYBR Green (a fluorophore that binds double-stranded DNA) can result from pr...

full text

مطالعه بیان ژن ureI هلیکوباکترپیلوری به روش RT-PCR

سابقه و هدف: هلیکوباکترپیلوری یک ارگانیسم مارپیچی شکل و گرم منفی بوده که عامل زخم معده است و نقش مهمی در ایجاد سرطان معده دارد. اجزای مختلف اوره آز، از عوامل مهم برای تحریک سیستم ایمنی هستند. هنوز واکسن موثری علیه این باکتری وجود ندارد و تحقیقات در زمینه یافتن واکسن، ضروری به نظر می رسد. هدف از تحقیق حاضر، ایجاد سازواره ژنی بر اساس ژن ureI و بررسی بیان آن است. مواد و روش­ها: در این مطالعه تجربی...

full text

Reproducibility in the quantification of mRNA levels by RT-PCR-ELISA and RT competitive-PCR-ELISA.

The use of reverse transcription (RT) PCR for relative quantitation of gene transcripts relies on the reproducibility of the individual RT, PCR and product measurement steps. Semi-competitive RT-PCR (RT-cPCR) uses an internal competitor template in the PCR step to improve quantitation. We have surveyed the reproducibility of RT, PCR, RT-cPCR and measurement, amplifying the glyceraldehyde-3-phos...

full text

بررسی میزان بیان تعدادی از ژن‎های دخیل در سرطان در چند رده سلول سرطانی مختلف به روش RT-PCR

چکیده فرم تغییریافته و یا جهش‎یافته ژن‎ها یا همان پروتو انکوژن‎ها، مسئول ترویج رشد و تکثیر کنترل‎نشده سلولی می‎باشند. تجمع جهش در ژن‎های مختلف و خاص، در طول زمان منجر به سرطان می‎شود. الگوی بیان ژن (امضا مولکولی)، برای هر کلاس از سلول‎های توموری اختصاصی است. این مقاله آخرین روش نظارت بر بیان یک پانل از ژن‎های خاص سرطانی را شرح می‎دهد. روش real-time PCR براساس عملکرد کمی رنگ SYBR GReen، به‎طور و...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
مجله دانشگاه علوم پزشکی همدان

جلد ۱۰، شماره ۲، صفحات ۵-۱۱

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023